2019年5月31日-6月4日，第55屆ASCO年會(huì)繼續(xù)相聚芝加哥，今年會(huì)議主題是:

　　ASCO會(huì)議內(nèi)容有許多關(guān)于液體活檢的研究進(jìn)展，今天我們通過(guò)ASCO會(huì)議來(lái)看看循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTCs在免疫治療和腫瘤免疫學(xué)中的相關(guān)報(bào)道。

 

1 PD-L1 expression on circulating tumor cells and prognosis of breast cancer patients.

【乳腺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞中的PD-L1表達(dá)和預(yù)后】

　　● 研究地區(qū)：中國(guó)·北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院

　　● 摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_247627.html

研究背景：目前臨床上部分患者能夠從PD1/PD-L1抑制劑治療中受益，也有有針對(duì)特定乳腺癌患者的臨床試驗(yàn)。雖然我們知道乳腺癌的預(yù)后與CTCs有關(guān)且對(duì)分子靶向治療的預(yù)測(cè)和監(jiān)督至關(guān)重要，但PD-L1在CTCs中的表達(dá)尚缺乏研究, 且對(duì)PD-L1檢測(cè)點(diǎn)抑制劑的預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物反應(yīng)缺乏。因此，本研究試圖探討乳腺癌患者CTCs中PD-L1的表達(dá)與預(yù)后及臨床病理特征的關(guān)系。

研究方法：通過(guò)基因探針雜交，分析20例原發(fā)性乳腺癌患者的CTCs和PD-L1基因在CTCs上的表達(dá)。采用卡方檢驗(yàn)分析臨床病理特征與CTCs中PD-L1表達(dá)的關(guān)系。采用Kaplan-Meier和單變量Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析比較高pd-l1表達(dá)和低pd-l1表達(dá)患者的生存率。

研究結(jié)果：

　　(1)在20名患者中，15名患者在其7.5ml外周血中檢測(cè)到有超過(guò)1個(gè)CTC，在這15名患者中，每名患者至少有1個(gè)CTC顯示PD-L1;

　　(2)將PD-L1在CTC上的表達(dá)分為低表達(dá)、中表達(dá)和高表達(dá)，然后給出低表達(dá)1分，中等表達(dá)2分和高表達(dá)3分，PD-L1高表達(dá)總分≥3，而PD-L1低表達(dá)總分<3;我們發(fā)現(xiàn)CTC上的PD-L1表達(dá)與腫瘤大小 (P=0.012) 淋巴結(jié)狀態(tài)(P=0.001) 和PR狀態(tài) (P=0.037) 有關(guān)，大腫瘤組T2和T3之間存在顯著差異(P=0.003) ;而在淋巴結(jié)狀態(tài)組中N1 vs N3 (P=0.000) 中N2 vs N3 (P=0.015) 之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;

　　(3)研究數(shù)據(jù)表明，與CTC上的低PD-L1表達(dá)相比，CTC上具有高PD-L1表達(dá)的患者總體存活率較差 (P=0.004) (表) ; 單變量Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示, CTC上高PD-L1表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。

結(jié)論：CTC上的PD-L1確實(shí)與一些不良的臨床病理特征相關(guān);CTC上PD-L1的高表達(dá)是較短存活的獨(dú)立預(yù)后因素，與較短的生存期相關(guān)。

 

2 Role of the expression of PD-L1 and CD47 on circulating tumor cells (CTCs) in the prediction of outcome in metastatic breast cancer (mBC) patients.

【循環(huán)腫瘤細(xì)胞 (CTCs) 上PD-L1和CD47表達(dá)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌 (mBC) 患者預(yù)后中的作用】

研究地區(qū)：希臘

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbsView_239_267255.html

研究背景：CTCs中中先天性免疫檢查點(diǎn) (CD47) 和適應(yīng)性免疫檢查點(diǎn) (PD-L1) 的檢測(cè)有可能協(xié)助對(duì)監(jiān)測(cè)免疫逃逸。在該研究中，評(píng)估了轉(zhuǎn)移性乳腺(MBC)患者CTCs中CD47和/或PD-L1表達(dá)與臨床特征之間的相關(guān)性。

研究方法：對(duì)98例MBC患者在一線治療開始前進(jìn)行血液采集。進(jìn)行外周血單核細(xì)胞 (PBMC) 細(xì)胞角蛋白 (CK) 、CD47和PD-L1的三重免疫熒光染色在，并使用Ariol顯微鏡系統(tǒng)分析每個(gè)患者1*106 PBMCs。用MDA.MB.231 乳腺癌細(xì)胞作為對(duì)照，對(duì)CK+CTCs的CD47和PD-L1表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo)化。

研究結(jié)果：

　　(1)22.4%(22/98)的患者檢測(cè)到CK+CTCs;分別在41.9%和11.6%的CTCs中鑒定出高CD47和PD-L1表達(dá)，而在9.1%的CTC中，兩種標(biāo)志物均觀察到高表達(dá);

　　(2)在11.2%的患者中鑒定出具有至少一種標(biāo)志物高表達(dá)(CD47-高和/或PD-L1-高)的CTC，盡管在三陰性、激素受體陽(yáng)性和HER2陽(yáng)性的原發(fā)性腫瘤患者中具有差異分布 (分別為27.3%、12.5% 、0%, p=0.040);CD47-高和/或PD-L1-高的CTCs與疾病進(jìn)展相關(guān)(27.8% vs 5.6%，p=0.005)，與較短的PFS相關(guān)【中位數(shù)5.8(4.1~7.5)vs 13.3(11.4~15.2)個(gè)月， p=0.010】，而僅檢測(cè)到PD-L1-高的CTCs與OS降低相關(guān)【中位數(shù)23.8(5.8~41.8)vs 35.7(29.9~41.4)個(gè)月，p=0.043】;

　　(3)多變量Cox回歸分析顯示CD47-高和/或PD-L1-高CTCs預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加【HR：2.7(95%CI：1.3~5.7); p=0.009】，而PD-L1-高CTCs與高死亡風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)【HR：4.8(95%CI：1.4~16.6); p=0.011】。

結(jié)論：免疫檢查點(diǎn)CD47和PD-L1在mBC患者的CTC子集中共表達(dá);在CTC上檢測(cè)到高CD47和/或PD-L1表達(dá)與三陰性腫瘤、疾病進(jìn)展和患者不良結(jié)果相關(guān)，并且可用于改善mBC中的預(yù)后;攜帶該類CTC群體的患者可受益于抗CD47和抗PD-L1免疫治療。

 

3 Circulating tumor cell (CTC) PD-L1 and interferon regulatory factor-1 (IRF-1) expression as biomarkers of anti-PD-(L)1 response.

【循環(huán)腫瘤細(xì)胞 (CTC) PD-L1和干擾素調(diào)節(jié)因子-1 (IRF-1) 表達(dá)作為抗PD- (L) 1應(yīng)答的生物標(biāo)志物】

研究地區(qū)：美國(guó)

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269835.html

研究背景：抗PD-L1檢查點(diǎn)抑制劑(CPI)由于其持久的反應(yīng)和耐受性顯著提高了多種實(shí)體瘤患者的生存率。不幸的是，只有一小部分實(shí)體瘤患者(PTs)有客觀反應(yīng)。假設(shè)CTCs中的PD-L1和IRF-1表達(dá)可能與CPI反應(yīng)相關(guān)，并對(duì)它們的表達(dá)進(jìn)行初步評(píng)估。

研究方法：對(duì)轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤患者行抗PD-L1單藥或聯(lián)合治療。在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)抽取7.5 cc的血液進(jìn)行CTC評(píng)估：基線、1次CPI劑量后、開始CPI后3-6個(gè)月或停止CPI時(shí)。外周血CTC用Accuyte試劑盒分離，并進(jìn)行CK/EPCAM、抗CD45、核染色、PD-L1和IRF-1染色。然后用Cytefinder軟件識(shí)別CTC。

研究結(jié)果：

　　(1)已登記16例患者，患者中位年齡71歲(28~83)、中位ECOG = 1(0~3);50%是女性;其中50%為NSCLC，13%為頭頸癌，13%為乳腺癌，24%為其他癌種;

　　(2)在基線時(shí)期，有13位患者血液中鑒定到了CTC(#CTCs范圍在0~101)，其中12位患者自開始CPI治療時(shí)接受影像學(xué)掃描，根據(jù)RECIST 1.1( 實(shí)體腫瘤的療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 1.1 版 )，其中3位患者有部分反應(yīng)(PR)，1位患者有穩(wěn)定疾病(SD)，8位患有疾病進(jìn)展(PD);具有PR的患者在基線時(shí)期的CTC上IRF-1染色更常見(jiàn)(表)，并且1/3的CTC PD-L1陽(yáng)性;

　　(3)6例具有腫瘤組織PD-L1染色的結(jié)果可用于相關(guān)性分析，其中3例為PD-L1+(陽(yáng)性定義為腫瘤組織PD-L1≥1%);腫瘤組織PD-L1+的1位患者具有PD-L1+的CTCs;在腫瘤組織PD-L1-的3位患者中，1位患者具有混合的PD-L1+/PD-L1-CTC群，而另2位CTC沒(méi)有檢測(cè)到PD-L1染色。

結(jié)論：CTC的分離和計(jì)數(shù)在不同實(shí)體腫瘤中都是可行的。抗PD-L1的PR患者可能具有較高的IRF-1+CTCs;不過(guò)該結(jié)果僅為初步，更多的pts和樣本正在評(píng)估中。

 

4 Quantification of activated and exhausted immune cell populations and simultaneous characterization of CTCs in peripheral blood of cancer patients receiving checkpoint inhibitor therapy

【接受檢查點(diǎn)抑制劑治療的癌癥患者外周血中活化和耗竭免疫細(xì)胞群的定量以及CTCs的表征】

研究地區(qū)：美國(guó)

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstiView_239_269185.html

研究背景：免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ICIs)正成為許多腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，但是有相當(dāng)一部分患者對(duì)ICIs此反應(yīng)不佳。單個(gè)生物標(biāo)志物如PD-L1在預(yù)測(cè)患者獲益方面不夠準(zhǔn)確。該研究試圖擴(kuò)展Epic Sciences無(wú)創(chuàng)液體活檢平臺(tái)，利用CTC分子分析和免疫細(xì)胞變化來(lái)識(shí)別ICIs的預(yù)測(cè)性外周血生物標(biāo)志物。

研究方法：從接受ICIs治療的前列腺癌、腎癌和膀胱癌患者中采集基線和治療時(shí)的血液樣本，并發(fā)送給EPIC科學(xué)。將核細(xì)胞鋪在玻璃載玻片上，對(duì)CTCs進(jìn)行免疫板染色(pan-ck，CD45，pd-l1和dapi)，其中活化的細(xì)胞(cd4，cd8，ki-67和dapi)，衰竭的免疫細(xì)胞(cd8，ki-67，pd-1，lag-3，tim-3和dapi)。免疫細(xì)胞和循環(huán)腫瘤細(xì)胞群的變化用高通量數(shù)字病理學(xué)進(jìn)行評(píng)估。

研究結(jié)果：73%(24/33)患者中檢出CTC，其中12%(4/33)患者中檢出PD-L1+CTC。9個(gè)受試治療樣本中未檢測(cè)到PD-L1+CTC。在14例匹配樣本的患者的基線相比，在治療樣本中57%(8/14)患者的活化CD4+白細(xì)胞增加，36%(5/14)患者的活化CD8+白細(xì)胞的增加。在匹配樣本的一個(gè)子集(14個(gè)樣本中的6個(gè))上進(jìn)行耗盡分析。在基線和治療樣本中，一名患者的CD8+白細(xì)胞消耗量高于健康供體對(duì)照組，兩名患者的CD8+白細(xì)胞消耗量低于對(duì)照組。從基線到治療期間，未觀察到耗盡的CD8+白細(xì)胞的變化。

結(jié)論：開發(fā)了一個(gè)基于液體活檢的平臺(tái)，可以同時(shí)測(cè)量單個(gè)外周血樣本中CTC和白細(xì)胞的生物標(biāo)志物。檢測(cè)ICIs治療后激活和耗盡的免疫細(xì)胞群的變化，并評(píng)估CTC上PD-L1的表達(dá),下一步的工作是將免疫細(xì)胞和罕見(jiàn)細(xì)胞群分層。

5 Clinical implication of monitoring PD-L1+ circulating tumor cells (CTCs) in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) receiving immunotherapy.

【在接受免疫治療的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者中監(jiān)測(cè)PD-L1+循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)的臨床意義】

研究地區(qū)：美國(guó)

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269637.html

研究背景：CTC是液體活檢的細(xì)胞組成部分，對(duì)這些細(xì)胞的檢測(cè)有助于鑒別殘留疾病和預(yù)后不良的患者。然而，對(duì)于不同類型的CTC是否可以用來(lái)監(jiān)測(cè)癌癥干性(Stemness)和患者的免疫治療反應(yīng)尚不清楚。目前，用于監(jiān)測(cè)CTC中癌干細(xì)胞標(biāo)記物(如CD44或CD166)和免疫治療靶點(diǎn)(包括PD-L1)的臨床數(shù)據(jù)有限。本研究假設(shè)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)這些標(biāo)記物的CTC陽(yáng)性與NSCLC患者對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療的反應(yīng)相關(guān)。

研究方法：作為外周血細(xì)胞前瞻性分析的一部分，納入了30例接受免疫治療(彭布羅珠單抗或阿托唑單抗)或聯(lián)合化療的NSCLC患者，每隔3-4周采集血樣，最多24周。分離并分析外周血單個(gè)核細(xì)胞的CD45，鑒定非白細(xì)胞CTC的CD166和CD4，鑒定潛在CTC中的PD-L1和癌癥干細(xì)胞標(biāo)記物。根據(jù)Recist標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估患者的反應(yīng)。采用單因素方差分析對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

研究結(jié)果：

　　(1)在第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)到的PD-L1+CD45-CTC減少與治療初始反應(yīng)最強(qiáng)相關(guān);相反，與疾病穩(wěn)定(SD)或部分緩解(PR)的患者相比，在疾病進(jìn)展的患者中發(fā)現(xiàn)PD-L1+CD45-細(xì)胞數(shù)量增加(p = 0.01);

　　(2)CD45-細(xì)胞、CD44+CD45-細(xì)胞、CD166+CD45-細(xì)胞顯示出與臨床結(jié)果無(wú)顯著相關(guān)性;

　　(3)CTC上的基線PD-L1水平與組織上的PD-L1水平無(wú)關(guān)。

結(jié)論：報(bào)告了免疫治療開始前后監(jiān)測(cè)血中CTC表面標(biāo)志物的可行性和潛在的臨床意義, 發(fā)現(xiàn)免疫治療無(wú)應(yīng)答者中PD-L1+CTCs的增加值需進(jìn)一步驗(yàn)證。

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